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PCR,Southern-blot和各種酶切反應。

發(fā)布時間: 2022-09-15  點擊次數(shù): 1099次


三.適用范圍:

    適用于快速提取各種動植物細胞/組織基因組DNA。

四.儲存條件:

1.結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.為避免降低活性、方便運輸,提供蛋白酶K為凍干粉狀,收到后,可短暫離心后,加入1ml滅菌水溶解,因為反復凍融可能會降低酶活性,因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存,-20℃保存。

3.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化,各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

五.注意事項:

1.所有的離心步驟均在室溫完成,使用轉(zhuǎn)速可以達到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機,如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2.需要自備1XPBS(磷酸鹽緩沖液),和異丙醇。

3.實驗前將需要的水浴先預熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

4.結(jié)合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

5.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫,但應該確保批pH大于7.5, pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在-20℃。DNA如果需要長期保存,可以用TE緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影響下游酶切反應,使用時可以適當稀釋。



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